培養基的滅菌及使用

1.每(mei)次配置時，要注(zhu)意(yi)其生產(chan)日(ri)(ri)期(qi)是否在(zai)保質(zhi)(zhi)期(qi)內(nei)，查看其開(kai)瓶(ping)日(ri)(ri)期(qi)及(ji)瓶(ping)口密封性，保證其未(wei)變質(zhi)(zhi)，并且未(wei)吸潮。
2.培養基配(pei)置時，稱量要準確(que)，包括鹽水(shui)的分(fen)裝要準確(que)。
3.一定要保證(zheng)現配(pei)制(zhi)現滅菌，未滅菌的配(pei)好培養基(ji)不能長時間放置，更不可(ke)隔夜。
4.滅(mie)(mie)菌時(shi)要保證恒溫、恒壓(ya)，同時(shi)要保證有效滅(mie)(mie)菌時(shi)間。
5.滅菌過的(de)培養基(ji)要冰箱保(bao)(bao)存，可(ke)保(bao)(bao)存一(yi)周(zhou)，一(yi)般不超(chao)過 3 天。而且要遵(zun)循“先(xian)入(ru)先(xian)出”原則，先(xian)配制(zhi)的(de)要先(xian)使用。
6.在使(shi)用時(shi)(shi)，要根據當班次的使(shi)用量，用水(shui)(shui)浴(yu)鍋先將培養基溶化(hua)為液態，然后及時(shi)(shi)調(diao)低水(shui)(shui)域溫度（先化(hua)好(hao)的可從水(shui)(shui)域取出，放在水(shui)(shui)浴(yu)鍋鍋蓋上）待用，千萬不(bu)可長(chang)時(shi)(shi)間使(shi)培養基處于高溫狀態。
7.做產品微生物檢測時，傾倒培養(yang)基(ji)溫(wen)度在(zai) 45℃左右(you)，不可(ke)過(guo)燙(tang)，避免將菌(jun)燙(tang)死(si)；也不可(ke)過(guo)涼(liang)，化好的培養(yang)基(ji)又結(jie)塊(kuai)凝固，不便于觀察結(jie)果。
8.每瓶培(pei)養基(ji)均要做空白。
9.盡量集中做樣(yang)，避免頻(pin)繁打開同一瓶培(pei)養基瓶塞，增大(da)培(pei)養基的污染幾率，出現(xian)誤差(cha)結果。
10.培養基剩(sheng)余過少(shao)時，可(ke)先(xian)將其傾倒(dao)成(cheng)空白用板(ban)。

做(zuo)樣環境的(de)維(wei)持

一、大環境（房間）
1.做樣時，窗戶和空調要關閉，或用酒(jiu)精對(dui)房間進行噴霧消毒，避免房間內空氣流通影響(xiang)超凈臺內部環境（在(zai)有(you)通排風系統的(de)恒溫恒濕(shi)無菌間進行操作(zuo)）。
2.如果在(zai)原(yuan)來(lai)的原(yuan)料微生物(wu)檢測室進行做樣，要(yao)定(ding)期開啟紫(zi)外燈，對(dui)房間進行殺菌(jun)。
二、小環境（超凈臺）
1.定期清潔(jie)初效過濾器，要及時更換。
2.做樣前(qian)(qian)，將超(chao)凈臺內(nei)部進(jin)行(xing)清潔，用 75%酒精(jing)進(jin)行(xing)擦拭消毒，并提前(qian)(qian)半小時將超(chao)凈臺紫(zi)外燈打開，對超(chao)凈臺內(nei)部環境(jing)進(jin)行(xing)殺菌。
3.關紫外燈，開(kai)風機，調整合適進(jin)風量，風量不可(ke)過低。
4.每次做樣后，要對(dui)超(chao)凈臺內部進行(xing)清(qing)理、清(qing)潔(jie)，并(bing)用(yong) 75%酒精進行(xing)擦(ca)拭消毒。
5.紫(zi)外(wai)燈根據其使用(yong)壽命(ming)要及(ji)時更換。
6.做(zuo)樣同時，要做(zuo)上相應菌落檢測的環(huan)境空白。
7.做樣(yang)區域的選擇(ze)：
①一般(ban)在距離超(chao)凈臺(tai)外沿的 1/3-2/3 區域進行無菌操作；
②要在酒精(jing)燈(deng)火焰的(de)外焰保護區域進行操作。

 工器具的潔凈度

1.玻璃器皿：采(cai)用(yong)干熱滅菌方式進(jin)行滅菌。

2.做樣用(yong)剪刀、勺子(zi)等物品要(yao)做到做樣，不可與其它操作器具混用(yong)，使(shi)用(yong)時，先用(yong)75%酒精消毒(du)，再采用(yong)灼(zhuo)燒方式(shi)進行(xing)滅菌。

3.接種針（環）采用灼燒方式進行滅菌，但要注意做樣時要先將接種針（環）進行冷卻。

樣品的采集及檢測

一、保證采樣器具的無菌性
1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌，保證恒溫、時間足夠（但不可時間過長，導致玻璃器皿易裂紋而報廢）。
2.取樣筐：使用前要用 75%酒精進行噴灑消毒
3.取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用 75%酒精進行擦拭消毒。
4.取樣袋：可現用酒精進行擦拭消毒，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。
5.電子稱表面用 75%酒精消毒。

二、人員操作
1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。
2.取樣要具有代表性（隨機樣、目的樣、綜合樣）且要標示清楚。
3.取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈臺，對其外表面進行紫外燈照射消毒。
4.在要求的做樣區域進行操作。
5.做樣前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。
6.往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。
7.樣品計量要準確，稀釋倍數也要準確（1mL 吸管不允許將管口敲掉），進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。
8.鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，將部分微生物燙死，也不能溫度太低，不能將奶粉溶解*。
9.進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。
10.傾倒平皿時，要注意培養基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。
11.做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好，放入超凈臺對外表面進行紫外線滅菌。
12.接二步時，要注意先將接種針（環）進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況發生，導致無法判斷、確認。
13.做樣(yang)完畢(bi)，及時放入相應培(pei)養箱進行培(pei)養，并清理(li)清潔超凈(jing)臺。