滅(mie)菌是(shi)指用物(wu)理(li)(li)或(huo)化(hua)學(xue)的(de)方法,殺死(si)物(wu)體(ti)表面(mian)和(he)孔隙內的(de)一切(qie)微(wei)生物(wu)或(huo)生物(wu)體(ti),即把所有生命的(de)物(wu)質全(quan)部殺死(si)。常用的(de)滅(mie)菌方法可分為物(wu)理(li)(li)的(de)和(he)化(hua)學(xue)的(de)兩類:物(wu)理(li)(li)方法如干熱(烘(hong)燒(shao)和(he)灼燒(shao))、濕熱(常壓或(huo)高壓蒸煮(zhu))、射線(xian)處理(li)(li)(超聲波、微(wei)波)、過(guo)濾、清洗(xi)和(he)大(da)量無菌水沖洗(xi)等措施。化(hua)學(xue)方法是(shi)使用甲醛、過(guo)氧化(hua)氫、高錳酸鉀、次氯(lv)酸鈉、抗菌素(su)、酒精(jing)化(hua)學(xue)藥品處理(li)(li)等。
微生(sheng)物檢查培養(yang)基常用的滅(mie)(mie)菌方(fang)法主(zhu)要(yao)是濕熱滅(mie)(mie)菌和過(guo)濾(lv)除菌。
1、濕熱滅(mie)菌:
蒸汽在冷凝時釋放出大量潛能,并且蒸汽具有強大穿透力(li),蒸汽的(de)(de)濕熱(re)(re)破壞菌體(ti)蛋白(bai)質和核酸的(de)(de)化學鍵,使(shi)酶失(shi)活,微生物(wu)因代(dai)謝障礙(ai)而(er)死(si)亡(wang)。濕熱(re)(re)滅(mie)菌的(de)(de)效果,取(qu)決于致(zhi)死(si)溫(wen)度和致(zhi)死(si)時間。致(zhi)死(si)溫(wen)度是殺滅(mie)微生物(wu)的(de)(de)極限溫(wen)度。致(zhi)死(si)時間是在致(zhi)死(si)溫(wen)度下殺滅(mie)全部微生物(wu)所需時間。
高(gao)壓(ya)蒸汽滅(mie)菌(jun)適(shi)合(he)于(yu)耐(nai)高(gao)溫(wen)(wen)培(pei)養基(ji)、接種器械和(he)蒸餾水的滅(mie)菌(jun)。培(pei)養基(ji)分裝后應(ying)立即滅(mie)菌(jun),應(ying)在當天內完(wan)成滅(mie)菌(jun)工作,不(bu)可過(guo)夜。消毒(du)時間(jian)不(bu)宜過(guo)長(chang),也不(bu)能超過(guo)規定的壓(ya)力范(fan)圍,否則有機物質就會(hui)在高(gao)溫(wen)(wen)下(xia)分解,失去(qu)營養作用(yong),也會(hui)使培(pei)養基(ji)變(bian)質、變(bian)色,甚至難以(yi)凝固。
培養基配(pei)制(zhi)后,應(ying)按驗證過(guo)的高壓滅菌(jun)(jun)程序滅菌(jun)(jun)。2015版《中(zhong)國藥典》第三(san)次(ci)公示(shi)稿,1106 非無菌(jun)(jun)產品微生物限度檢(jian)查(cha):控制(zhi)菌(jun)(jun)檢(jian)查(cha)法(fa)中(zhong),列(lie)出部(bu)分培養基的滅菌(jun)(jun)條件,如下(xia)表所示(shi):
培養基名(ming)稱 | 滅菌條件 |
腸道菌增菌液(ye)體培養基 | 加(jia)熱至100℃ 30分鐘,立(li)即冷卻 |
紫紅膽鹽葡(pu)萄糖瓊脂培養基 | 加熱(re)煮(zhu)沸(fei)(不能在高壓滅菌器中加熱(re)) |
RV 沙門菌增(zeng)菌液體(ti)培(pei)養基 | 滅菌溫(wen)度不能超(chao)過115℃ |
木糖賴氨酸(suan)脫氧膽酸(suan)鹽瓊脂培養(yang)基(ji) | 加熱(re)至沸(fei)騰(teng)(不能在高壓滅菌器中(zhong)加熱(re)) |
其他(ta)未明確標示滅菌方法(fa)的培養(yang)基(ji),按(an)供(gong)應商標簽所示滅菌方法(fa)滅菌或按(an)驗證過的高壓滅菌程序滅菌。
2、過濾除菌(jun):
一些抗生素(su)(su)及有(you)機物等(deng),遇熱(re)容易分解,不能與培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)一起進行高(gao)溫滅菌(jun),而要使(shi)用細(xi)菌(jun)過濾(lv)器濾(lv)去其中(zhong)的雜菌(jun),例如(ru)含抗生素(su)(su)的沙(sha)氏葡萄糖瓊脂培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)。過濾(lv)后的溶液要立即加(jia)入培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)中(zhong),若(ruo)為液體培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji),可(ke)在培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)冷(leng)卻(que)至30℃時(shi)加(jia)入;若(ruo)為固體培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji),必須在培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)凝固之前(qian)(50-60℃)加(jia)入,振蕩使(shi)溶液與其他(ta)成分混合均(jun)勻。
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