培養基的滅菌及使(shi)用

1.每次配置時，要注意其生產(chan)日期是否在保質(zhi)期內，查看其開瓶日期及瓶口(kou)密封性(xing)，保證(zheng)其未(wei)變質(zhi)，并(bing)且(qie)未(wei)吸潮。
2.培養基配置時，稱量(liang)要(yao)準確，包括鹽水的(de)分(fen)裝要(yao)準確。
3.一(yi)定要保證現(xian)配(pei)制(zhi)現(xian)滅菌(jun)，未(wei)滅菌(jun)的配(pei)好培(pei)養(yang)基不能長時間放(fang)置(zhi)，更不可隔夜。
4.滅菌時(shi)要(yao)保證恒(heng)溫、恒(heng)壓(ya)，同(tong)時(shi)要(yao)保證有(you)效(xiao)滅菌時(shi)間。
5.滅菌過的培(pei)養基要冰箱(xiang)保(bao)存(cun)，可保(bao)存(cun)一周，一般不超(chao)過 3 天(tian)。而且要遵循“先入先出”原則，先配制(zhi)的要先使用。
6.在使用時(shi)，要根據當班(ban)次的使用量，用水浴鍋(guo)先將培養(yang)基溶化(hua)為液態，然后及時(shi)調低水域溫度（先化(hua)好的可從水域取(qu)出，放在水浴鍋(guo)鍋(guo)蓋(gai)上）待用，千萬不(bu)可長時(shi)間使培養(yang)基處(chu)于高溫狀態。
7.做產品微生物檢測(ce)時，傾倒培(pei)養基溫度在 45℃左右，不(bu)可過燙(tang)，避免將菌燙(tang)死；也不(bu)可過涼(liang)，化好的培(pei)養基又結塊凝固，不(bu)便于觀察結果。
8.每瓶培養基均要(yao)做(zuo)空(kong)白。
9.盡(jin)量(liang)集中(zhong)做樣，避(bi)免(mian)頻繁打開(kai)同一瓶培養基瓶塞，增大培養基的污染幾率，出(chu)現誤差結果(guo)。
10.培養基剩余過少時，可先將其傾倒成空白用板。

做樣(yang)環境的維持(chi)

一、大環境（房間）
1.做樣(yang)時，窗戶和(he)空調要關閉(bi)，或用酒精對房(fang)間進(jin)行噴霧消(xiao)毒，避(bi)免房(fang)間內空氣流(liu)通影(ying)響超凈臺(tai)內部環境(jing)（在有通排風系統的恒溫恒濕無菌間進(jin)行操作）。
2.如果在原來的原料微生(sheng)物檢測室(shi)進行做(zuo)樣，要定期開啟紫外燈，對房間進行殺(sha)菌。
二、小環境（超凈臺）
1.定期清(qing)潔初效過濾器(qi)，要及時更換。
2.做樣前，將(jiang)超凈臺內部進行(xing)清潔，用 75%酒精(jing)進行(xing)擦拭消毒，并提前半小時將(jiang)超凈臺紫(zi)外燈打開，對(dui)超凈臺內部環境進行(xing)殺(sha)菌。
3.關紫外(wai)燈，開風(feng)(feng)機，調整合適進風(feng)(feng)量(liang)，風(feng)(feng)量(liang)不可過低。
4.每(mei)次(ci)做(zuo)樣后，要對超(chao)凈臺內部(bu)進行清理(li)、清潔，并用 75%酒精進行擦拭消毒。
5.紫外燈(deng)根據其使用壽(shou)命要及(ji)時更換。
6.做樣同時，要做上(shang)相(xiang)應菌落檢測的(de)環境空白。
7.做樣區域的選擇：
①一般在距離超(chao)凈(jing)臺外沿的 1/3-2/3 區域進行無菌操(cao)作；
②要在(zai)酒精燈火焰的外焰保護區域進行操(cao)作。

 工器具的潔凈度(du)

1.玻璃器皿：采(cai)用干熱滅(mie)(mie)菌方式進行滅(mie)(mie)菌。

2.做(zuo)樣用(yong)剪刀(dao)、勺子(zi)等物品要做(zuo)到做(zuo)樣，不可與其它操作器具混用(yong)，使用(yong)時，先用(yong)75%酒精消(xiao)毒(du)，再采用(yong)灼燒(shao)方式進行滅菌。

3.接種針（環）采用灼燒方式進行滅菌，但要注意做樣時要先將接種針（環）進行冷卻。

樣品的采(cai)集及(ji)檢測(ce)

一、保證采樣器具的無菌性
1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌，保證恒溫、時間足夠（但不可時間過長，導致玻璃器皿易裂紋而報廢）。
2.取樣筐：使用前要用 75%酒精進行噴灑消毒
3.取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用 75%酒精進行擦拭消毒。
4.取樣袋：可現用酒精進行擦拭消毒，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。
5.電子稱表面用 75%酒精消毒。

二、人員操作
1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。
2.取樣要具有代表性（隨機樣、目的樣、綜合樣）且要標示清楚。
3.取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈臺，對其外表面進行紫外燈照射消毒。
4.在要求的做樣區域進行操作。
5.做樣前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。
6.往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。
7.樣品計量要準確，稀釋倍數也要準確（1mL 吸管不允許將管口敲掉），進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。
8.鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，將部分微生物燙死，也不能溫度太低，不能將奶粉溶解*。
9.進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。
10.傾倒平皿時，要注意培養基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。
11.做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好，放入超凈臺對外表面進行紫外線滅菌。
12.接二步時，要注意先將接種針（環）進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況發生，導致無法判斷、確認。
13.做樣完(wan)畢，及時放(fang)入相應培養箱進行培養，并清理清潔超凈臺。